Producta
Instrumentum detectionis Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR pro 2019-nCoV
Usus expectatus
Hoc instrumentum ad detectionem qualitativam novi coronaviri (2019-nCoV) adhibetur utens penicillis gutturis, penicillis nasopharyngeis, liquido bronchoalveolari, sputo. Resultatum detectionis huius producti tantum ad referentiam clinicam est, et non debet adhiberi ut sola evidentia ad diagnosim clinicam et curationem. Analysis comprehensiva condicionis commendatur una cum manifestationibus clinicis aegroti et aliis probationibus laboratorium.
Principium inspectionis
Instrumentum hoc in technologia RT-PCR uno gradu fundatur. Re vera, gena ORF1ab et N novi coronaviri anni 2019 (2019-nCoV) ut regiones amplificationis destinatae selectae sunt. Initiatores specifici et specilla fluorescentia (specilla geni N cum FAM et specilla ORF1ab cum HEX notantur) ad RNA novi typi coronaviri anni 2019 in exemplaribus detegendum destinantur. Instrumentum etiam systema detectionis moderationis internae endogenae (specilla geni moderationis internae cum CY5 notata) includit ad processum collectionis exemplorum, RNA et amplificationis PCR monitorandum, ita eventus falsos negativos reducendo.
Partes principales
| Partes | Volumen()48T/Instrumentum() |
| Solutio reactionis RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture（ORF1ab,N Gene,RnaseP Gene） | 864µl |
| Imperium negativum | 1500µl |
| nCOV Positive contro（l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Reagentia propria: reagentia extractionis vel purificationis RNA. Moderatio negativa/positiva: Moderatio positiva est RNA fragmentum destinatum continens, moderatio negativa autem est aqua sine acido nucleico. Dum adhibentur, in extractione participare debent et infectiosa habenda sunt. Secundum regulamenta pertinentia tractanda et eliminanda sunt.
Gen referentiae internae est gen RnaseP humanum.
Conditiones repositionis et dies expirationis
-20±5℃, vitanda est repetita congelatio et liquefactio plus quam quinquies, valet per sex menses.
Instrumentum applicabile
Cum FAM / HEX / CY5 aliisque instrumentis PCR fluorescentibus multicanalibus.
Requisita speciminis
1. Genera speciminum applicabilia: penicilli gutturis, penicilli nasopharyngei, liquor lavacri bronchoalveolaris, sputum.
2. Collectio speciminis (technica aseptica)
Peniculus pharyngeus: Tonsillas et parietem pharyngeum posteriorem duobus peniculis simul deterge, deinde caput peniculi in tubum experimentale solutionem exempli continentem immerge.
Sputum: Post tussim profundam aegroto, sputum extussum in tubo experimentali operculo cochleato colligendum est, solutionem speciminis continente; liquor lavacri bronchoalveolaris: specimina a peritis medicis colligenda. 3. Conservatio et transportatio speciminum.
Specimina ad virus isolandum et RNA examinandum quam primum examinanda sunt. Specimina quae intra horas 24 detegi possunt ad 4℃ conservari possunt; quae intra horas 24 detegi non possunt...
horas ad -70℃ vel infra conservandae sunt (si nulla condicio conservationis -70℃ est, conservandae sunt
(ad -20℃ in armario frigorifico temporarie conservanda). Specimina iterum atque iterum congelata et liquefacta per transportationem vitanda sunt. Specimina quam primum post collectionem ad laboratorium mittenda sunt. Si exempla per longas distantias transportanda sunt, conservatio in glacie sicca commendatur.
Methodi Probationis
1 Processus speciminis et extractio RNA (area processus speciminis)
Suadetur ut 200μl exempli liquidi ad extractionem RNA sumantur. Pro gradibus extractionis conexis, vide instructiones instrumentorum extractionis RNA commercialium. Tam negativa quam negativa...
Controlla in hoc apparatu in extractione implicata sunt.
2 Praeparatio reagentium PCR (area praeparationis reagentium)
2.1 Omnia elementa e sarcina remove et ad temperaturam cubiculi liquefac atque misce. Ante usum centrifuga ad 8000 rpm per aliquot secunda; quantitatem reagentium requisitam calcula, et systema reactionis paratur ut in sequenti tabula demonstratur:
| Partes | Portio N (systema 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Solutio reactionis RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = numerus exemplorum probatorum + 1 (exemplar negativum) + 1 (nCOV)imperium positivum) | |
2.2 Postquam partes diligenter permiscueris, breve tempus centrifuga ut omnis liquor in pariete tubi ad fundum tubi cadat, deinde systema amplificationis 20 µl in tubum PCR infunde.
3 Exemplum (area praeparationis speciminis)
Post extractionem, 5 μl probationum negativarum et positivarum adde. RNA exempli examinandi in tubum reactionis PCR additur.
Tubulum arcte claude et ad 8000 rpm per aliquot secunda centrifuga antequam in aream detectionis amplificationis transferas.
4 Amplificatio PCR (area detectionis amplificata)
4.1 Tubum reactionis in cellam exemplaris instrumenti pone, et parametros sic constitue:
| scaena | Cyclus numerus | Temperatura(°C) | Tempus | collectiositus |
| Inversustranscriptio | 1 | 42 | Decem minuta | - |
| Prae-denaturation | 1 | 95 | Unum minutum | - |
| Cyclus | 45 | 95 | Quindecim | - |
| 60 | Triginta anni | collectio datorum |
Selectio canalis detectionis instrumenti: Canales FAM, HEX, CY5 pro signo fluorescentiae elige. Pro fluorescenti referentiali NONE, ROX noli eligere.
5 Analysis eventuum (Ad configurationem, vide instructiones experimentales cuiusque instrumenti)
Post reactionem, eventus serva. Post analysin, valorem initialem, valorem finalem, et valorem liminalem lineae basalis secundum imaginem (usor secundum condicionem actualem adaptare potest, valor initialis ad 3~15, valor finalis ad 5~20 constitui potest) in graphio logarithmico adapta. Ad limen fenestrae, linea liminalis in phase logarithmica est, et curva amplificationis moderationis negativae linea recta vel infra lineam liminalem est.
6. Moderatio qualitatis (Modus proceduralis in experimento inclusus est). Moderatio negativa: Nulla curva amplificationis manifesta pro canalibus detectionis FAM, HEX, CY5.
COV positivum moderamen: curva amplificationis manifesta canalum detectionis FAM et HEX, valor Ct ≤32, sed nulla curva amplificationis canalis CY5;
Requisita supradicta simul in eodem experimento implenda sunt; alioquin experimentum irritum est et iterandum est.
7 Determinatio eventuum.
7.1 Si curva amplificationis nulla est aut valor Ct > 40 in canalibus FAM et HEX exemplaris examinati, et curva amplificationis in canali CY5 est, iudicari potest nullam RNA novi coronaviri 2019 (2019-nCoV) in exemplo esse;
.2 Si exemplum examinatum curvas amplificationis manifestas in canalibus FAM et HEX habet, et valor Ct ≤40 est, iudicari potest exemplum positivum esse pro novo coronaviro anni 2019 (2019-nCoV).
7.3 Si exemplum examinatum curvam amplificationis claram in uno tantum canali FAM vel HEX habet, et valor Ct ≤40 est, et nulla curva amplificationis in altero canali apparet, eventus iterum examinandi sunt. Si eventus repetitionis congruunt, exemplum positivum pro novo iudicari potest.
coronavirus 2019 (2019-nCoV). Si eventus repetitionis probationis negativus est, iudicari potest exemplum negativum esse pro novo coronavirus 2019 (2019-nCoV).
Valor iudicii positivi
Methodus curvae ROC adhibita est ad valorem CT referentiale apparati determinandum, et valor referentialis moderationis internae 40 est.
Interpretatio eventuum probationum
1. Omne experimentum pro moderationibus negativis et positivis examinandum est. Resultatus probationum determinari possunt tantum cum moderationes requisitis qualitatis satisfaciunt.
2. Cum canales detectionis FAM et HEX positivi sunt, eventus ex canali CY5 (canale moderationis internae) negativus esse potest propter certamen systematis.
3. Cum eventus controlli interni negativus est, si canales detectionis FAM et HEX tubi probatorii etiam negativi sunt, significat systema inactivum esse vel operationem erroneam esse, probationem invalidam esse. Ergo, exempla iterum probanda sunt.
