Products
Lifecosmus Sars-Cov-2-RT-PCR Detection ornamentum pro MMXIX-nCoV
Usus expectata
Hoc ornamentum adhibetur pro detectione qualitativa novorum coronavirorum (2019-nCoV) obiectis faucium utentibus, swabis nasopharyngeis, fluido bronchoalveolare lavacro, sputum. Deprehensio effectus huius producti tantum ad clinicos referendi est, et uti non solum utendum est. evidentia pro clinicis diagnosi et treatment. Comprehensiva analysis condicionis commendatur in compositione cum manifestationibus orci patientis et aliis probationibus laboratorium.
principium inspectionis
Ornamentum ab uno gradu RT-pcr technologiae fundatur.Re vera, 2019 novus coronavirus (2019-nCoV) ORF1ab et N genes delecti sunt ut regionum scopo amplificatio.Specificia primariorum et proborum fluorescentium (probabilia gene N cum FAM et ORF1ab intitulata sunt cum HEX intitulata sunt) designantur ad 2019 novum genus coronavirus RNA deprehendere in speciminibus.Ornamentum etiam includit endogenous systematis interni deprehensionis (internum imperium gene probe intitulatum cum CY5) ad monitor processus collectionis sample RNA et PCR amplificationis, inde falsas negativas proventus minuens.
Principalis components
| Components | Magnitudo.48T/Kit. |
| RT-pcr reactionem solutionem | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture（ORF1ab,N Gene,RnaseP Gene） | 864µl |
| Negans imperium | 1500µl |
| nCOV Positive contro（l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Reagenti proprium: RNA Extractio: vel purgatio reagentia.Imperium negativum/positivum: Imperium positivum est RNA continens fragmentum scopo, dum imperium negativum est aqua nucleica acido-libera.In usu, extractionem participare debent et infectiosis considerari debent.Secundum normas congruentes tractandae sunt et disponendae.
Gene referens internus est gene RnaseP humanum.
Repono conditionibus et expirata
-20±5℃, evitanda congelatio et tabida plus quam 5 times, per menses sex valida.
Lorem instrumentum
Cum FAM / HEX / CY5 et alii multi-fluorescentes per canalem instrumenti.
Specimen requisita
1.Applicable specimen types： gutturi swabs, swaps nasopharyngea, bronchoalveolaris aquatica, sputum。
2.Specimen collectio (ars asetica
Swab pharyngeus: Exterge tonsillas et murum pharyngeum posterius cum duabus obiectis simul, deinde caput swab immerge in tubo testiculo continens solutionem sampling.
Sputum: Post gravem tussim aeger, tussim eructatam collige in cochleae cap testudinis tubulum continens solutionem sampling;lavacrum bronchoalveolar fluidum Sampling by medical professionales.3.Storage et translationem exempla
Specimina solitarii et probatio RNA quam primum exploranda sunt.Specimina quae intra 24 horas deteguntur, in 4° condi possunt;ea quae non possunt deprehendi in XXIV "
horae condi -70℃or infra (si nulla condicio -70 ceptacula sit, esse debent
ad tempus repositum -20℃ leo).Specimina saepe congelatio tabidaque per translationem vitare debent.Specimina ad officinam quam primum post collectionem mittantur.Si exemplaria necessaria per longas intervalla transportari debent, glacies sicca commendatur.
Test Methodi
I Sample processui et RNA extractionem (sample processus area)
Commendatur ut 200μl liquoris specimen pro RNA extractione sumatur.Gradus extractionis cognatae referuntur ad instructiones RNA extractionis kitarum commercialium.Tam negativa quam negativa
controllata in hoc ornamento extractione implicabantur.
PCR II Praeparatio reagens (paratio reagens area)
2.1 Aufer omnia membra ab ōrnāmentō et tabiā et misce ad ōrnāmentum ōrnāmentum.Centrifugium ad 8,000 rpm paucis secundis ante usum;quantitatem reagentium requisitam computare, et ratio reactionis praeparata est ut in sequenti tabula ostensum est:
| Components | N serviens (25µl ratio) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl N |
| RT-pcr reactionem solutionem | 2 µl N |
| *N = exempla numero probata + 1 (potestatem negativam) + 1 (nCOV .).positivum imperium) | |
2.2 Permixtis partibus, paulisper centrifugium est, ut omne liquorem in paries tubi ad fundum tubi defluat, et deinde 20 µl systema amplificationis in PCR tubum alliget.
III Sampling (specimen praeparationis regio)
Adde 5μl de imperiorum negativorum et positivorum post extractionem.RNA specimen experiendi ad fistulam reactionem additur.
Cap tubus arcte et centrifugium ad 8,000 rpm brevi tempore antequam eam ad amplificationem deprehensionis area transferat.
IV PCR amplificationem (amplificata detectio area)
4.1 Reactionem fistulam in cellula instrumenti sample pone et parametros sic pone:
| scaena | Cycle numerus | Temperature(°C) | Tempus | collectionesite |
| Reversetranscription | 1 | 42 | 10min | - |
| Pre-denaturation | 1 | 95 | 1min | - |
| Cycle | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | notitia collectio |
Instrumentum deprehensionis canalis delectu: Canalem FAM、HEX、CY5 elige pro signo fluorescentiae.Ad referentiam fluorescentium NONE, quaeso, non elige ROX.
5 Ex analysi (Quaeso referri ad instructiones experimentales cujusvis instrumenti ad occasum)
Post reactionem, nisi a consequitur.Post analysin, valorem inceptivum, valorem desinentem, ac valorem limen baseline secundum imaginem (usor aptare potest secundum ipsam condicionem, principium valoris ad 3~15 apponi potest, finis pretii apponi potest. 5~20, temperatio) in graphi logarithmo In limen fenestrae, linea limen est in periodo logarithmica, et amplificatio curvae moderaminis negativi est recta linea vel infra limen).
6 Quauty control（A moderatio processualis comprehenditur in potestate negativa test: nulla manifesta amplificatio curvae pro FAM, HEX, CY5 detectionis channelsn
COV imperium positivum: patet amplificatio curvarum FAM et HEX detectionis canalium, Ct value≤32, sed nulla amplificatio curvae canalis CY5;
Haec necessaria in eodem experimento simul occurrere debent;secus experimentum irritum est et iterari debet.
7 Determinatio eventuum.
7.1 Si nulla est amplificatio curvae vel Ct valoris > 40 in FAM et HEX ductus experimenti specimen, et amplificatio curvae in CY5 canali, iudicari potest nullam esse MMXIX novus coronavirus (2019-nCoV) RNA in sample;
.2 Si experimentum specimen in FAM et HEX canalibus amplificationem manifestam habet et valor Ct valorem ≤40 est, iudicari potest specimen esse positivum pro MMXIX novus coronavirus (2019-nCoV).
7.3 Si specimen specimen claram habet curvam amplificationem in uno tantum alveo FAM vel HEX, et valorem Ct valorem ≤40, nec in altero canali amplificatio nulla est, necesse est eventus reprobetur.Si retest eventus constantes sint, exemplum positivus iudicari potest pro novo
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Si retest effectus negativus, iudicari potest specimen esse negativum pro MMXIX novus coronavirus (2019-nCoV).
Positivum iudicium valorem
Methodus curva ROC adhibenda est, ut referat CT valorem ornamenti et imperium internum referat ad valorem XL.
Proventuum testium interpretatio
1. Unumquodque experimentum probetur per imperium negativum et positivum.Proventus test solum definiri non potest, cum imperium ad qualitatem imperium requisita
2. Cum canales FAM et HEX deprehendendi sunt affirmativi, effectus e canali CY5 (canalis ditionis interni) potest esse negativus propter systematis competition.
3. Cum effectus interna potestate negativa est, si fistulae FAM et HEX detectae canales etiam negativae sunt, significat systema debilitatum aut operandi iniustum esse, experimentum invalidum esse.Ideo exempla reponenda sunt.
